اساطین جمع اسطوانه است و به ستونهایی گفته می شود که ساختمان بر ان بنا شده باشد. ستون های مسجد النبی در عهد پیامبر صلی الله علیه و سلم از تنه های درخت خرما بود که امروز بجای آنها ستونهایی ساخته شده است و هر کدام یادآور سیرت رسول الله صلی الله علیه و سلم است.


اسطوانه توبه
این ستون دومین ستون از حجره و مرقد رسول الله صلی الله علیه و سلم و به موازات ستون سریر در شرق و ستون عایشه در غرب است. این ستون به ستون ابی لبابه هم معروف است بدلیل اینکه ابولبابه بعد از مخالفت دستور پیامبر در جنگ بنی قریظه و به قولی دیگر بخاطر مخالفتش در جنگ تبوک خود را به این ستون بست و سوگند خورد که خود را باز نکند تا خدا او را ببخشد و خود رسول الله صلی الله علیه و سلم او را باز کند.


اسطوانه حرس یا محرس
این ستون که در میان ستون های وفود و سریر واقع شده به ستون علی بن ابی طالب رضی الله عنه نیز نامگذاری شده است . این ستون بعد از در حجره ی ام المومنین عایشه رضی الله عنها قرار دارد و رسول الله صلی الله علیه و سلم از طریق این در وارد مسجد می شد و علی رضی الله عنه کنار این ستون می نشست تا از پیامبر حراست و نگهبانی کند.


اسطوانه سیده عایشه
این ستون سومین ستون از منبر و قبر رسول الله صلی الله علیه و سلم و سومین ستون از قبله است که به ستون مهاجرین هم شناخته می شود چون مهاجرین گراگرد آن می نشستند. نام دیگر این ستون قرعه است چون صحابه برای نماز خواندن کنار آن قرعه می انداختند.


اسطوانه سریر
این ستون متصل به ضریح پیامبر صلی الله علیه و سلم در دیواره غربی است و علت نامگذاری آن به سریر این است که برای پیامبر کنار این ستون تختی قرار داده بودند که ایشان جهت پاسخگویی به مردم بر آن می نشست.


اسطوانه حنّانه
ستون حَنّانه ، نام یکی از ستون‌های مسجد النبی نزدیک ستون مخلقه است. این ستون در محل درخت نخلی قرار دارد که بنا بر گزارش‌های تاریخی از فراق پیامبر صلی الله علیه و سلم نالید. رسول الله صلی الله علیه و سلم از تنه این درخت بعنوان منبر استفاده می کردند وقتی که منبر جدیدی ساخته شد از آن تنه درخت صدای ناله بلند شد. از میان ستونهای مسجدالنبی امروزه این ستون تنها ستونی است که باقی نمانده است.


اسطوانه مخلقه
ستون مخلقه محل نهادن عود و نزدیک‌ترین ستون به محراب پیامبر صلی الله علیه و سلم در مسجدالنبی می‌باشد.
مُخَلَّقه از خَلوق يا خَلاق به معناي بوي خوش، گونه‌اي عِطر است كه بخش عمده آن از زعفران است. اين ستون از آن رو مُخلَّقه (عطرآگين) نام گرفت كه براي معطرسازي فضاي مسجد، آن را به خلوق مي‌آغشتند يا بر آن عود مي‌سوزاندند. این ستون به نامهای معطره و مطیبه نیز معروف است و پیامبر نمازهای سنت را کنار این ستون می خواندند.


اسطوانه وفود
ستون وفود سومین ستون از سمت قبله و به ضریح متصل است و محلی است که پیامبر برای ملاقات با سران قبایل و هیآت ها اختصاص داده بود و کنار همین ستون با آنها ملاقات می کرد. این ستون را مجلس القلاده نیز می نامیدند؛ چرا که بزرگان در کنار آن می نشستند و به گفتگو می پرداختند.


اسطوانة مربعة القبر یا مقام جبرئیل

این ستون کنار در خانه ی دختر پیامبر سیده فاطمه رضی الله عنها درون ضريح و در انتهای سمت شمالی حجره شريف جای گرفته و در ديدرس زائران نيست. این ستون چون کنار قبر چهارگوشه پیامبر واقع است، ستون مربعة‌القبر نام گرفته است. آن را ستون مقام جبرئیل نیز خوانده‌اند؛ زیرا جبرئیل در این مکان بر پیامبر نازل می‌شد. به این ستون، ستون معرس نیز گفته‌اند.


اسطوانه تهجد

ستون تهجد پشت خانه ی دختر پیامبر سیده فاطمه رضی الله عنها قرار گرفته که امروزه این ستون درون ضريح پيامبر جاي گرفته و بر سنگ مرمري كه آن‌جا نهاده‌اند، نوشته‌اند: «هذا متهجد النبي: اين‌جا مكاني است كه پيامبر نافله شب مي‌گزاردند.